生物技术克隆动值物观后感选录(3)
2022-05-27 来源:百合文库
2.1 RT-PCR扩增USF1基因
以大白猪cDNA为模版，利用引物U1F/U1R，U2F/U2R，U3F/U3R均扩增出了特异带，RT-PCR扩增产物结果如图1所示。将PCR产物回收、纯化、克隆测序，测序结果显示引物U1F/U1R扩增产物长度为613 bp(图1a)，引物U2F/U2R扩增产物长度为312 bp(图1b)，引物U3F/U3R扩增产物长度为520 bp(图1c)。
2.2 猪USF1基因的cDNA序列同源性分析
利用DNAStar软件的SeqMan程序将RT-PCR扩增得到的片段进行拼接，得到一条长1 382 bp的 cDNA序列。将获得的猪USF1基因的cDNA序列分别与人USF1基因cDNA序列(NM_007122)和小鼠序列(NM_009480)进行比对。结果表明，猪与人、小鼠的同源性分别为99%和98%，确定所获取的序列为猪的USF1基因，提交到GenBank，得到登录号为EF 219407。
2.3 猪USF1与部分物种USF1的进化关系
利用GenBank已有的USF1蛋白质序列： NP_001001161(USF1，Cattle)，NP_001007486(USF1， Gallus)，NP_009053(USF1，Human)，NP_033506 (USF1， Mouse)， NP_113965(USF1，Rat)以及猪USF1基因编码的氨基酸序列， 利用ClustalW软件对6个物种的USF1氨基酸序列进行了序列比对，结果发现猪与人和牛的同源性达到了99%，与小鼠和大鼠的同源性达到了98%，并构建了系统进化树(图2)。
2.4 猪USF1基因组序列的克隆和序列分析
以大白猪cDNA为模版，利用引物U1F/U1R，U2F/U2R，U3F/U3R均扩增出了特异带，RT-PCR扩增产物结果如图1所示。将PCR产物回收、纯化、克隆测序，测序结果显示引物U1F/U1R扩增产物长度为613 bp(图1a)，引物U2F/U2R扩增产物长度为312 bp(图1b)，引物U3F/U3R扩增产物长度为520 bp(图1c)。
2.2 猪USF1基因的cDNA序列同源性分析
利用DNAStar软件的SeqMan程序将RT-PCR扩增得到的片段进行拼接，得到一条长1 382 bp的 cDNA序列。将获得的猪USF1基因的cDNA序列分别与人USF1基因cDNA序列(NM_007122)和小鼠序列(NM_009480)进行比对。结果表明，猪与人、小鼠的同源性分别为99%和98%，确定所获取的序列为猪的USF1基因，提交到GenBank，得到登录号为EF 219407。
2.3 猪USF1与部分物种USF1的进化关系
利用GenBank已有的USF1蛋白质序列： NP_001001161(USF1，Cattle)，NP_001007486(USF1， Gallus)，NP_009053(USF1，Human)，NP_033506 (USF1， Mouse)， NP_113965(USF1，Rat)以及猪USF1基因编码的氨基酸序列， 利用ClustalW软件对6个物种的USF1氨基酸序列进行了序列比对，结果发现猪与人和牛的同源性达到了99%，与小鼠和大鼠的同源性达到了98%，并构建了系统进化树(图2)。
2.4 猪USF1基因组序列的克隆和序列分析
物品拟人腐肉
