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生物技术克隆动值物观后感选录(2)

2022-05-27 来源:百合文库
pMD-18T vector system、DH5α购自宝生物工程(大连)有限公司;Gel Extraction Kit购自生工生物工程(上海)股份有限公司。

生物技术克隆动值物观后感选录60条


1.2 引物设计
以人的基因序列为探针,利用NCBI中的BLAST工具在GenBank数据库中搜索同源序列,筛选猪的同源性EST(标准:长度≥200 bp,相似性≥80%),用DNAStar软件包中的SeqMan程序进行EST序列拼接,参照拼接的contig(重叠群)采用Primer5.0软件设计引物U1F/U1R,U2F/U2R,U3F/U3R等3对引物扩增USF1基因的cDNA序列。参照USF1基因的cDNA序列设计U4F/U4R,U5F/U5R,U6F/U6R,U7F/U7R,U8F/U8R,U9F/U9R等6对引物(表1)扩增USF1基因的序列。引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
1.3 PCR扩增与测序
PCR扩增体系为25 μL,包括50 ng 模板DNA、2.5 mmol/L 1×Taq Buffer、1.5 mmol/L MgCl2、2.5 mmol/L dNTPs、0.5 mmol/L PCR primers、2 U Taq DNA聚合酶。PCR反应程序为:94 ℃预变性4 min; 94 ℃变性45 s,退火(温度、时间根据引物来确定),72 ℃延伸90 s,35个循环;最后72 ℃延伸10 min。PCR产物以1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,用Gel Extraction Kit试剂盒纯化回收,与pMD-18T vector system连接,并转化大肠杆菌DH5α,将阳性克隆送至北京奥科生物技术有限公司测序。
2 结果与分析
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